Experimental quality control design

 实验质控设计

实验质控设计

Olink为其多重生物标志物面板设计了严格的内置 QC 系统。该QC系统对检测的各主要环节都能起到严格把控,保障数据质量。

质控体系:

内参: 由四个内参组成,它们被添加到每个样品中,旨在监测 Olink 检测过程中的三个主要步骤:免疫反应(孵育步骤)、延伸和扩增/检测。

内参

数量

说明

图示

孵育内参

2

孵育对照 1 和 2 是用 PEA 测量的两种不同的非人类抗原。这些对照监控所有三个步骤中的潜在系统波动。

 
 

延伸内参

1

由与一对独特的 DNA 标签偶联的抗体组成。这些 DNA 标签在同一抗体上,因此该内参能够提供独立于免疫反应的恒定信号,起到监测延伸和扩增/检测步骤中的变化,并用于调整来自每个样品的关于延伸和扩增的信号。

 
 

检测内参

1

检测内参是一个完整的双链 DNA 扩增子,不需要任何邻近结合或延伸步骤来产生信号,起到监测扩增/检测步骤。

 
 

外部对照: 一共8个外部对照,它们被添加到每个样品板上的单独孔中。在图示的板上有 88 个样品、2 个称为外部样品对照的混合血浆样品、3 个阴性对照和 3 个板间对照。

板间对照: 板间对照 (IPC) 在每个板上一式三份,作为正常样品运行。 IPC 是一个由 92 个抗体组成的库,每个抗体都有一对固定靠近的独特 DNA 标签,可以看作是一个合成样品,有望为所有检测提供高信号。 IPC 三次重复的中位数用于标准化每个测定,以补偿运行和板之间的潜在差异。

 

 

阴性对照: 阴性对照也包括在每个板上一式三份,由缓冲液作为正常样品运行组成。这些用于监测当 DNA 标签靠近而没有事先与适当的蛋白质结合时产生的任何背景噪音。阴性对照为每个蛋白质测定设置背景水平,并用于计算检测限 (LOD)。

 

 

样本对照: 建议在每个板上运行一式两份的混合血浆样品。这些用于评估运行和板之间的潜在变化,例如计算批间和批内 CV,以及故障排除。